Il naquit à Venise, le 1er juillet 1381, dans une famille illustre et très religieuse. Ordonné diacre en 1404, il rejoignit une communauté de chanoines réguliers installée sur l’île de San Giorgio in Alga dans la lagune de Venise. Admiré pour sa ferveur, sa pauvreté et les mortifications auxquelles il se soumettait, il fut ordonné prêtre vers 1407 et choisi comme prieur de sa communauté deux ans plus tard.

Le 12 mai 1433, il fut nommé évêque de Castello par le pape Eugène IV et mit son énergie à la réforme de son diocèse. En 1451, sous le pape Nicolas V, le diocèse de Castello fut rattaché au patriarcat de Grado (Frioul-Vénétie Julienne), et le siège du patriarcat transféré à Venise : Laurent Justinien devint ainsi le premier patriarche de Venise, quatre siècles et demi avant saint Pie X.

Laurent Justinien vécut toujours dans la prière, la pauvreté, la mortification et la simplicité (il disait : « Il faut éviter les affaires trop compliquées. Il y a toujours du démon dans les complications. »), et ses prédications et enseignements furent essentiels aux fidèles qu’il dirigeait ; il laissa d’ailleurs de nombreux écrits théologiques et pastoraux. Il mourut à Venise le 8 janvier 1456 et fut canonisé par Alexandre VIII le 16 octobre 1690.