Fils d’un Grec et d’une juive convertie au Christ, né au début du Ier siècle, il avait une vingtaine d’années lorsque saint Paul le choisit comme compagnon d’apostolat. Il accompagna l’apôtre dans la plupart de ses missions, fut son envoyé auprès des habitants de plusieurs villes, le suivit en prison à Rome, avant d’être nommé par lui évêque d’Ephèse. Il fut le destinataire de deux épîtres de saint Paul, qui le considérait comme son « véritable fils dans la foi » (1 Ti, I, 2), son « enfant bien-aimé et fidèle dans le Seigneur » (1 Co, IV, 17).

A Ephèse, Timothée rencontra saint Jean l’évangéliste. C’est dans cette ville qu’il mourut en martyr en l’an 97, pour s’être opposé à un culte païen : « Après avoir soutenu plusieurs combats pour Jésus-Christ, ce zélé ministre, reprenant un jour les païens qui sacrifiaient à Diane, fut accablé d’une grêle de pierres, et peu de temps après s’endormit au Seigneur. »